IMUNOFENOTIPAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO DO LÍQUIDO PLEURAL

CARACTERIZAÇÃO CELULAR E PERSPECTIVAS DIAGNÓSTICAS NA TUBERCULOSE PLEURAL

Resumo

Introdução: A tuberculose pleural (TBPl) é uma manifestação extrapulmonar da tuberculose causada pelo Mycobacterium tuberculosis, caracterizada por baixa carga bacilar e diagnóstico desafiador. A resposta imunológica na TBPl é predominantemente celular, com intensa participação de macrófagos, que atuam na fagocitose do bacilo, apresentação de antígenos e secreção de citocinas pró-inflamatórias, além de interagirem com células Natural Killer (NK). Estas integram a imunidade inata e desempenham funções citotóxicas diretas contra células infectadas, além de produzirem citocinas, como o interferon-gama (IFN-γ), que potencializam a ativação de macrófagos e modulam a imunidade adaptativa. Apesar dessa resposta imunológica robusta, o diagnóstico da TBPl permanece difícil devido à baixa quantidade de bacilos no líquido pleural. As técnicas tradicionais, como baciloscopia e cultura, apresentam sensibilidade limitada. Outras abordagens incluem análise bioquímica, exames histopatológicos de biópsia pleural, métodos moleculares como PCR e, mais recentemente, ferramentas imunológicas voltadas à caracterização do perfil celular local. Neste meio a citometria de fluxo permite caracterizar fenótipos celulares no líquido pleural, podendo auxiliar na diferenciação de causas de derrames pleurais exsudativos.Objetivo: O presente estudo teve como objetivo determinar a frequência de células NK e NKT no líquido pleural e sangue periférico, por meio da citometria de fluxo,  de pacientes com TBPL em comparação com pacientes com derrames pleurais por outras etiologias. Metodologia: Foi conduzido um estudo transversal, analítico e prospectivo no Hospital Universitário Pedro Ernesto HUPE/UERJ, envolvendo pacientes com derrame pleural associado a TBPl ou outras etiologias. Todos os participantes foram submetidos à toracocentese para coleta do líquido pleural, que foi processado por citometria de fluxo e analisado paralelamente por citomorfologia, foi realizado também Cytometric Bead Array (CBA) para quantificar níveis de citocinas dos perfis Th1/Th2/Th17/TNF/IFN-γ. Resultados: No total, 21 amostras foram analisadas (7 TBPl e 14 não-TB). Os achados preliminares indicaram uma maior frequência da subpopulação NKT em pacientes TBPl (1,01%) em comparação aos pacientes NTB (0,47%), diferença que alcançou significância estatística (p < 0,0260). Por outro lado, não foram identificadas diferenças nas frequências das subpopulações NK CD56 Dim e NK CD56 Bright. Adicionalmente, a análise do perfil de citocinas revelou que pacientes com TBPl níveis elevados de IFN-γ (p<0,05) e TNF-α (p<0,05) citocinas pró-inflamatórias fundamentais para a resposta imune contra o M. tuberculosis. Por fim, foram observadas correlações positivas significativas entre a frequência de células NKT e IFN-γ no líquido pleural de pacientes com TB (p < 0.05). Conclusão: Os resultados deste estudo revelaram achados relevantes, incluindo maior frequência de células NKT em pacientes com TBPl, acompanhada de níveis elevados de IFN-γ e TNF-α, além de correlação positiva significativa entre a presença de NKT e a produção de IFN-γ no líquido pleural. Esses dados reforçam a importância dessas células na resposta imune contra o M. tuberculosis e apontam para seu potencial papel como biomarcadores. Entretanto, por se tratarem de análises preliminares baseadas em um número limitado de amostras, torna-se necessário ampliar a casuística para validar esses resultados e possibilitar investigações mais robustas, incluindo a avaliação de novos marcadores de ativação e citotoxicidade.